cck8实验原理【cck8实验原理是什么】

cck8实验原理是什么

实验原理如下：CCK8基于水溶性四唑盐WST化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐），WST8在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的脱氢酶还原生成橙黄色的甲臜染料（formazan）。甲臜染料能够溶解在组织培养基中，与活细胞数量成正比。CellCountingKit简称CCK试剂盒，是一种基于WST-化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。在电子耦合试剂（也就是细胞是活的，有呼吸，有能量代谢）存在的情况下，可被NAD+氧化还原成为水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan)。活细胞越多，产生的Formazan就越多，颜色也会越深。cck8实验原理细胞活力检测试剂盒(CCK-可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。CCK即CellCountingKit-与MTT法的主要区别如下：原理不同CellCountingKit-CCK-8试剂盒利用了日本同仁化学研究所（Dojindo）开发的四唑盐WST-2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)。

cck8实验原理

cck8实验原理是如下：实验原理：细胞活力检测试剂盒(CCK-可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为：该试剂中含有WST-8。cck8实验怎么看有没有细胞毒性CCK-8是一种基于WST-8的检测细胞增殖和细胞毒性的方法。WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。cck8实验细胞种板：将对数生长期细胞用胰蛋白酶消化，配制成细胞悬液，每孔加入100μl，使每孔细胞密度1000-5000个，边缘孔用无菌PBS填充。5%CO37℃培养至细胞贴壁铺满孔底。按实验方案加入药物。每种处理建议设置4-6个复孔。cck8实验步骤及注意事项如下：在96孔板中配置100μL的密度为2×104个/ml的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时(37℃,5%CO。按一下浓度梯度和时间点,加药物处理;将培养板在培养箱孵育一段时间(0-7天共8个时间点)。

MTT实验和CCK8的区别

CCK-8法能快速检测；CCK-8法的检测灵敏度很高，甚至可以测定较低细胞密度；CCK-8法的重复性优于MTT法；CCK-8法对细胞毒性小；CCK-8细胞活性检测试剂中为1瓶溶液，毋需预制，即开即用。当然，与MTT相比，CCK8有以下2点不足：与MTT法相比，CCK8和XTT的价格比较贵。CCK-8法能快速检测。CCK-8法的检测灵敏度很高，甚至可以测定较低细胞密度。CCK-8法的重复性优于MTT法，产生的formazan是水溶性的，减少因洗涤和溶解带来的误差。CCK-8法对细胞毒性小，可以多次测定选取最佳测定时间，与MTT方法相比线性范围更宽，灵敏度更高。在CCK-8试剂盒中，最主要的化学药品是WST-化学名为2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐。它的核心基团和MTT是一样的，是MTT的升级版本。现在应用最多的是CCK-8法。CCK8基本与MTT是一样的，优点是产物溶于水，所以避免了有机溶剂溶解甲月赞的既节省了时间，还大幅提高了一致性。当然最精确的还是同位素标记法。

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