itraq(itraq试剂使用前是否需要室温平衡)

itraq试剂使用前是否需要室温平衡

30分钟。根据查询公开信息显示，选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30分钟。试剂，英文名：reagent。又称化学试剂或试药。主要是实现化学反应、分析化验、研究试验、教学实验、化学配方使用的纯净化学品。只有平衡至室温后才能和现实生活中的实际情况符合，而且化学试剂的活性也会回复到正常状态，才能使实验正常进行。将试剂盒从冷藏环境中取出并将所需试剂从试剂盒取置室温(20-25℃)平衡30min注意每种液体试剂使用前均须摇匀。配液:将40ml浓缩洗涤液(20倍浓缩)用去离子水稀释至800ml备用(或按需量稀释),稀释好的洗涤液在4℃环境可保存一个月,使用前也需回温。试验前将所需试剂盒组分在室温或37℃平衡30分钟；试剂盒及其组分的保存按试剂盒操作说明书进行；保存试剂盒的冰箱应经常检查储存温度并作好记录；保存试剂盒的冰箱应避免频繁开关。严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

itraq实验对蛋白浓度有什么要求

样品iTRAQ/TMT项目设计体外等重同位素标记定量技术，可同时比较多个样本之间的蛋白表达量差异（通常10个样本以下）。基本原则：Labelfree项目设计Labelfree是通过比较肽段母离子质谱峰强度，分析不同来源样品蛋白的表达量差异。该技术无需昂贵的同位素标记做内标。而如果是相对定量，如itraq这种技术，比的是不同样本中同一种蛋白含量相对高低，结果给出的是一个蛋白在不同样本中上调/下调几倍，这样必须要求相比较的样本起始量是相等的。比如常见的werstern实验中，比较一个蛋白在不同样本的表达量高低，上样量也是要求蛋白总量一致。超滤:可以截留10kDa及以上的蛋白分子,适用于体积较小的样品。操作步骤可以是,从100μL超滤浓缩到40μL,再加缓冲液至100μL,再超滤到40μL,反复几次。它含有14种蛋白抗针对血清中的高丰度蛋白能很有针对性地去除,需要的样品量通常为20μL-40μL,20μL的血清样品可以得到约100微克的蛋白样品,40μL的量足够我们做一次iTRAQ或labelfree实验了。第三种试剂盒是Thermo的PierceAlbumin/IgG的试剂盒,可以去两个高丰度蛋白。

itraq结果中两次技术重复不一致的结果该如何处理?

但是因为样品不一致，fold可以根据需要调整，但是至少要说明你这样取值的一个基本依据。要是发论文，iTRAQ一次结果不可信，至少要求两次重复。对于两次有差别的问题，需要用统计学方法处理，要求两次试验可重复的数据才可用。否则，数据不可信。“样品重复”，也可以称为生物重复。生物重复是指样品来自同一处理组的不同样品，是整个实验的完全重复，如平行培养的细胞或细胞株。技术重复是指对同一生物样品进行重复实验，可降低实验中的测量误差或背景噪音。上机重复是指是指同一样品进行重复上机检测。绝大多数采用常规蛋白质组技术的血液研究，都是先利用亲和等方法将血液中高丰度蛋白（白蛋白、IgG等）去除掉，再做蛋白组分析。因为常规蛋白质组受到高丰度信号的影响非常严重。如果不预先去除高丰度蛋白，获得的结果中大量的数据都是大家所不关注的高丰度蛋白的数据，有意义的数据非常少。在该模式在多个小范围的质荷比窗口中的所有母离子顺序碎裂产生更复杂的MS2结果。然后将这些结果与预先定义好的谱图库进行匹配,通过大范围的肽分级达到最大的蛋白质组深度。蛋白定量检测方法蛋白定量检测技术多种多样,按照检测范围可分为靶向与非靶向技术,也可按照定量方式分为相对定量或绝对定量技术。

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